高速逆流色谱仪常用的溶剂体系选择
点击次数：2235 更新时间：2020-07-22
1、分配系数测定法
一个稳定的两相溶剂体系是否适合于目标物质的分离，通常要看物质在该溶剂体系中的分配系数是否在一个合适的范围内。分配系数K=CS/CM或CU/CL。其中CS指溶质在固定相中的浓度，CM指在流动相中的浓度，CU指溶质在上相中的浓度，CL指溶质在下相中的浓度。一般而言，对HSCCC合适的K值范围是0.5~2。当CS/CM≤0.5时，出峰时间太快，峰之间的分离度较差；当CS/CM≥1时，出峰时间太长且峰形变宽。而当0.5<CS/CM<2时，可以在合适的时间内，得到分离度较好的峰形。
2、 薄层色谱法
采用薄层色谱（TLC）法也可选择对HSCCC合适的两相溶剂体系。在硅胶板上作薄层色谱试验，用水饱和的有机层（即两相中的有机相）作展开剂。如果需要分离的组分的Rf＞0.5（低级性溶质），这说明此种条件适用于这些组分混合物的分离，而且弱极性的有机相适用于作流动相。对于极性较大的溶质Rf＜0.5，则极性较强的那一相可作流动相。
3、PLC扫描法
对于一个未知样品，可以通过HPLC扫描的方法，对样品的复杂程度及其组分的极性程度有一个初步的了解。具体来讲，可以将样品注入一根15cm长的C18HPLC柱，以乙腈和水为流动相，以1ml/min流速，从100%乙腈梯度洗脱1h，观察样品出峰的位置。如果绝大部分峰的保留时间都小于15min，也就意味着这些组分是由含量小于25%的乙腈流动相洗脱出来的，在高速逆流色谱仪中可以采用极性溶剂体系，如正丁醇-水等；如果峰的保留时间是在15～50min之间，意味着这些物质具有中等极性，在CCC中可以采用中等极性溶剂；如果绝大部分峰在50min后洗脱出来，也就是由大于80%的乙腈流动相洗脱出来的，那么在CCC分离中应该采用弱极性的容积体系。
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